MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，也可以用DMSO来溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。该方法已广泛用于抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

MTT粉末和配置好的溶液都需要用铝箔纸包好避光保存。实验的时候尽量关闭超净台上的日光灯进行避光操作。
 
步骤如下：
1：接种细胞：用含10％胎小牛血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔 1000－10000个细胞的密度接种到96孔板中，每孔体积200ul.
2：培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul. 继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔的光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标来绘制细胞生长曲线。

实验实例：

不同基因的过表达慢病毒感染细胞，继续培养三天后，收集对数期细胞，向96孔板每孔加入2000个细胞，细胞培养箱孵育至细胞贴壁,向孔板中加入MTT溶液，并继续培养4h。最后去除MTT，加入二甲基亚砜溶解MTT，酶标仪读取OD490时的吸光值。

CON：未处理细胞实验组；
NC：对照慢病毒感染实验组；
OE：目的基因过表达慢病毒感染实验组。
结论：目的基因过表达后，细胞生长受到抑制。


注意事项：
（1）选择适当的细胞接种浓度。
（2）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。
（3）设空白对照：与试验平行，不加细胞只加培养液的孔设为空白对照。其他试验步骤保持一致，最后比色以空白调零。
 
CCK8
 
Cell Counting Kit简称CCK8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
WST-8属于MTT的升级产品，工作原理为：在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物（formazan）。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在490mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。
 
实验步骤(以下为药物处理实例)
1、在96孔板中配置100μL的密度为2×104个/ml的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时（37℃，5% CO2）。
2、按一下浓度梯度和时间点，加药物处理;
3、将培养板在培养箱孵育一段时间（0-7天共8个时间点）。
4、向每孔加入10μL CCK8溶液（注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数。
5、将培养板在培养箱内孵育1小时。
6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。



通常研究药物毒性时会涉及半抑制率，即IC50，,意思是抑制率50％的时候药物的浓度。把药品稀释成不同的浓度，然后计算各自的抑制率，以药品的浓度为横坐标，抑制率为纵坐标作图，然后得到50％抑制率时候的药品浓度，就是IC50。
 
 
BrdU掺入实验
 
    溴脱氧尿嘧啶核苷是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。BrdU与胸腺嘧啶竞争掺入的强溴脱氧尿嘧啶核苷是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入S期细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。BrdU与胸腺嘧啶竞争掺入的强度可能与细胞增殖异常有关，如肝癌细胞约11.6%的胸腺嘧啶被替代，而正常肝细胞仅有1.1%。
   既往在分子遗传学等研究中常采用同位素标记，但有放射污染，技术难度大，实验周期长等缺点。近年来非放射性标记物的研究发展迅速，然而其敏感性多数不及同位素，使实验应用受限。自82年Gratzer制备出抗BrdU单抗及标记检测技术不断改良提高，应用BrdU标记的敏感性已与氘胸腺嘧啶核苷相似。目前认为BrdU是最有希望取代同位素的非放射性标记物之一。
 
详细步骤：
第1天
1. 用100μM的BrdU工作液（用5mg/ml的储存液以6μL/mL稀释而成）标记细胞。 胚胎干细胞，30分钟 ；3T3细胞，2.5小时 ；二倍体成纤维细胞，4－6小时。
2. 胰酶消化细胞，用PBS洗脱，400×g或1700rpm离心5分钟，去上清，加入10 mL 70% EtOH重悬。
3. 保存在－20℃过夜或数天。
第2天
1. 将第一天的标本离心去上清，并用洗涤缓冲液（PBS + 0.5% IFS）洗涤。
2. 离心去上清，以0.5 mL 2M HCl + 0.5% IFS （Keratin intermediate filaments (IFs)必须新鲜配制！），室温孵育20分钟。
3. 加入1ml洗涤缓冲液洗涤细胞。
4. 离心去上清，以0.1M的四硼酸钠（Na2B4O7）重悬细胞，室温孵育2分钟。
5. 用1ml洗涤缓冲液洗涤细胞2次（分出一部分细胞用于PI单染，见第10步）
6. 用50μL洗涤缓冲液重悬细胞，加入anti-BrdU抗体，4℃孵育20分钟。
7. 加入1.5ml洗涤缓冲液洗一次。
8. 用50μL洗涤缓冲液重悬细胞，加入用于封闭Fc段的抗体（如FITC-conjugated rabbit anti-mouse (F(ab')2 fragments等），4℃孵育20分钟。
9. 加入1.5ml洗涤缓冲液洗涤一次。
10. 以0.3ml PI（10μg/ml）重悬细胞，室温孵育30分钟。准备上机。