1. 每孔应该接种多少细胞？
贴壁细胞每孔至少需要接种1,000个细胞 (100 μl的培养基)，检测白细胞时由于它的灵敏度较低，每孔至少需要接种2,500 个细胞 (100 μl的培养基)，建议先做几个孔摸索接种细胞的数量。如果要使用24孔板或是6孔板实验，请先计算每孔相应 的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK- 8溶液。
2. 如何设定空白对照？
在不含细胞的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验 (细胞毒性实验) 时，还应考虑药 物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度作为空白对照。
3. 哪些物质会影响CCK- 8的测定？
当有还原性物质存在时会影响CCK- 8的测定，增加O.D值；在有氧化性物质存在时会抑制测定反应的发生，减小O.D值； 在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。
4. 在做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？
有时会有影响。如果药物具有还原性，就会和CCK- 8试剂发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否 有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK- 8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (只加CCK-8) 的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK- 8之前更换培养基，去掉药物的影响。
5. CCK- 8对细胞的毒性大小如何？
CCK- 8对细胞的毒性相当低，同样的细胞在CCK- 8法检测后还可用于其他细胞增殖的检测实验，如结晶紫检测法，中性 红检测法或DNA荧光检测法等。
6. CCK- 8的保质期有多久？
CCK- 8在避光0-5℃的条件下可以存放1年，在-20℃下避光可以保存2年。如果需要长期保存，我们推荐在-20℃储藏。 在常温下可以保存3周左右，颜色应该为浅红色，如果颜色发生改变，则可能会增加空白吸光度。
7. 我没有450 nm的滤光片，还可以使用哪些其他的滤光片？
您可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片，但是450 nm滤光片的检测灵敏度最高。
8. CCK- 8能否对活细胞进行染色?
不能。因为CCK- 8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST®- 8)，并通过电子载体1- Methoxy PMS将活细胞中的电子交 换到培养基中的WST®- 8上，因为WST®- 8及其生成的甲臜染料是高度水溶性的，不会进入细胞内，所以CCK- 8不能对 活细胞进行染色。
9. 必须设定参比波长吗？设定的目的是什么？
不一定要设定，CCK- 8试剂在参比波长处没有吸光度。设定参比波长的目的是为了去除由于样品浑浊所带来的吸收。
10. 如果O.D值太低，可以采取什么办法？ 可以采取2个办法：