《原理图》
细胞凋亡是指为维持有机体内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。正常情况下,任何细胞在形成过程中发生的异常都会通过凋亡消除。例如,体内的癌细胞增长为肿瘤的过程会受细胞凋亡的引导而被抑制。然而,在抑癌基因p53出现问题时,凋亡就不会诱导发生,从而导致癌细胞的不断增长。
细胞凋亡可以通过细胞形态的变化或生物化学的变化来检测。目前常用的指标有caspase活性变化、DNA碎片、磷脂酰丝氨酸的外翻等。
Annexin V染色的细胞可以用于检测细胞凋亡早期的细胞膜变化。在细胞凋亡早期,膜磷脂酰丝氨酸由脂膜内侧翻向外侧。
Annexin V是一种Ca离子依赖性磷脂结合蛋白,可以与磷脂酰丝氨酸特异结合。用绿色荧光FITC标记的Annexin V通过流式细胞仪或荧光显微镜可以检测到细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,PI只能透过凋亡晚期和死细胞的细胞膜,因此Annexin V和PI结合使用,可以区分凋亡早晚期的细胞及死细胞。
《所需的设备和材料》
- 样品和诱导剂
- PBS、去离子水
- 合适量程的移液器
- 细胞培养用6,12,24,96孔板
- 流式细胞仪或荧光显微镜。
* 最大激发/发射波长 Annexin V, FITC: 494 nm/518 nm;PI: 535 nm/617 nm
《溶液制备》
1×Annexin V Binding solution:将10×Annexin V Binding Buffer用超纯水稀释10倍。
《稳定性》
试剂盒在0-5℃下可以保存6个月,请避光保存Annexin V, FITC结合物。
《储存条件》
0-5℃,避光 (切勿冻存)
《运输条件》
室温 *实验实例及操作步骤请参考中文说明书
《参考文献》
1) Casciola-Rosen L, Rosen A, Petri M, Schlissel M, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, 93(4)1624.
2) van Engeland M, Ramaekers FC, Schutte B, Reutelingsperger CP, Cytometry, 1996, 24(2), 131.
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