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试剂耗材

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大型/大量质粒提取试剂盒(溶液型、转染型)

产品介绍【返回】

货号: DP109-01
供应商: 上海觅拓
保存条件: 各组成分保温不同
规格: 20T

产品介绍
    本试剂盒用碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA,采用独特的溶液配方和内毒素清除试剂,只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质,获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280通常在1.8左右,得到的质粒可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的工作中。纯化后期过程均在Eppendorf管中操作,方法简单,不需特殊设备,无需过柱,不用酚氯仿抽提;基本可完全回收细菌裂解释放出的质粒,不必担心质粒DNA的丢失。本方法提取纯化质粒DNA,对质粒损伤小,即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或超大型BAC/PAC质粒,只要碱裂解法能够提取,就可以有效纯化。 
产品特点
    1. 不需要使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。快速、方便、从100-140ml大肠杆菌LB(Luria-Bertani)培养液中,可快速提取
      0.2-0.5mg纯净的高拷贝质粒DNA,提取率达80-90%。
    2. 获得的质粒产量高,超螺旋比例高,纯度好,可直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
    3. 内毒素含量极低(<10 EU/μg DNA),可直接应用于细胞转染。 
产品储存
    本产品收到后按照说明书指示温度存放各成份,储存18个月不影响使用效果。 
 

自备试剂

    异丙醇、70%乙醇、TE

 

注意事项

    1. 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒,应加大菌体使用量,同时按比例

       增加P1、P2、P3的用量。

    2. 提取大质粒时操作动作要轻柔,应该使用剪大了开口的吸头,防止机械剪切对DNA的损坏。

    3. DNA沉淀液沉淀离心后,可能看不到明显沉淀。如未见沉淀,担心DNA丢失,可保留上清液,待完成全部操作后电泳鉴定,以确定是否获得终

       产物(数百微克DNA离心沉淀在管的侧壁上,可能无法看到明显团块)。

    4. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带,也可

       能为2条或者多条DNA条带,这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成,与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。

       本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过95%。

 

实验图例

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