保存条件:本产品收到后按照上面指示温度存放各成份,至少一年内有效。蛋白标准-20℃长期保存,常温运输。
产品介绍:
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。原理是在碱性的条件下,蛋白质中的肽键能将Cu2+还原成Cu1+(双缩脲反应),且Cu2+的还原量与总蛋白量成正比,生成的Cu1+和独特的BCA Solution A(含有BCA)相互作用形成紫色复合物。两分子的BCA螯合一个铜离子形成复合物,该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性,吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系,因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
产品特点:
1.操作简单,45min内完成测定,比经典Lowry法快4倍而且更加方便。
2.灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl。
3.BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20,60,80。
4.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5.在测定范围内有较好的线性关系,变异系数小。
注意事项:
1.蛋白标准请在全部溶解后先混匀,再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。标准品曲线配制时,如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制,或者使用精确度高的加样枪。
2.Solution A和Solution B混合成工作液时可能会出现浑浊,但充分振荡混匀后就会消失,成为淡绿色的透明溶液。
3.酶标仪的测定波长为540-590nm之间,562nm最佳;需96孔板。如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但是测定蛋白浓度时,需根据测定吸光度的杯子的体积,按比例调整A液,B液和样品的体积。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂 盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
4.BCA蛋白定量试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保无EDTA, EDTA低于10mM,二硫苏糖醇低于1mM,β-巯基乙醇低于1mM。不适用BCA法时建议使用Bradford法蛋白定量试剂盒。还可以考虑用超纯水稀释,透析/除盐,ACETONE/TCA沉淀 蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。
5.为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热,但是切勿过热。
6.如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景,请试用Bradford法蛋白定量试剂盒。