NovaBright™分泌型胎盘碱性磷酸酶 (SEAP) 报告基因化学发光报告基因检测试剂盒2.0是第二代化学发光报告基因检测方法,用于分泌型胎盘碱性磷酸酶 (SEAP) 或非分泌型胎盘同功酶 (SEAP) 的超灵敏检测。该方法的超灵敏检测动态范围达5个数量级。该检测系统采用高性能碱性磷酸酶底物CSPD®、已获专利的新一代化学发光增强剂,以及专利设计的、可特异性抑制内源性非胎盘型碱性磷酸酶活性的缓冲液系统。其性能超过了前几代化学发光检测方法,同时也大大优于比色法和荧光检测法。该新试剂盒比其他检测方法操作过程简单得多。该方法为匀质检测,仅需两种溶液,且这两种溶液均为即用型。延长的发光动力学提供了稳定的光信号,增加了信号读取时间的灵活性。检测信号直接用化学发光酶标仪测量,不需要使用加样器。
报告蛋白SEAP分泌到细胞培养基中,可通过对培养基取样检测出。由于SEAP是分泌到培养基中的,就无需裂解细胞。同时,亦可通过裂解细胞检测碱性磷酸酶胎盘型同功酶 (PLAP)。灵敏的碱性磷酸酶检测方法在许多生命科学领域中得到应用,包括基因表达、病毒功能检测、疫苗研发、基因治疗病毒载体和基因导入方法的研发、体内基因表达监测、新的细胞功能检测方法等。SEAP检测是最早、也是最快速的转染效率优化方法之一。
前几代NovaBright™分泌型胎盘碱性磷酸酶 (SEAP) 报告基因化学发光检测试剂盒广泛用于报告基因的检测,以测量稳定细胞系或转染的原代细胞的基因表达,包括基因敲除、RNA干扰的读取。该测试方法广泛用于病毒功能的检测,包括病毒基因表达检测、病毒复制、病毒融合性、病毒的中和以及病毒介导的细胞间融合、病毒感染性。使用SEAP报告蛋白对报告基因的体内检测非常有用,通过检测转基因、转染或病毒载体感染的动物的血清样本即可。NovaBright™报告基因检测系统已用于测量转基因或转染的整体动物血清中SEAP水平,包括小鼠、大鼠、狨猴、猴子和猪血清以及鸡卵尿囊液。最近,小鼠SEAP蛋白 (mSEAP) 被开发用于提高转基因小鼠的SEAP的稳定性,而NovaBright™ SEAP检测方法也用在了mSEAP的高灵敏检测上。除了用在报告基因(基因表达)领域外,该检测系统还可用于SEAP蛋白作为功能报告基因,用于配体上嵌合了SEAP蛋白的受-配体结合反应、蛋白酶介导蛋白分泌及分泌通路活性检测。在以非胎盘型碱性磷酸酶为生物标志物的细胞检测方面,NovaBright™检测系统也有应用。
Assay Type: | Phosphatase Assay |
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Detection Method: | Chemiluminescent |
For Use With (Equipment): | Luminometer (Microplate) |
Format: | 96-well plate |
High Throughput Compatibility: | High Throughput-Compatible |
Product Line: | NovaBright™ |
Product Size: | 10 x 96 well plates |
Readout: | End Point |
Substrate: | CSPD® |
Substrate Properties: | Chemical Substrate |
Substrate Type: | AP (Alkaline Phosphatase) Substrate |
Target Enzyme: | Placental Alkaline Phosphatase |
Technique: | Enhanced Chemiluminescence |
Component solution containing CSPD® substrate and chemiluminescence enhancer (Store at 2-6°C), placental alkaline phosphatase positive control (Store at ≤ -20°C)