基于纳米颗粒技术为基础的适用于多种细胞高效转染的一款核酸转染试剂
发布时间：2020-12-21 11:08:06
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NP80TM
Transfection Reagent
货号：QS-1122-10
NP80TM
转染试剂是基于纳米颗粒技术为基础的适用于多种细胞高效转染的一款核酸转染试剂。由于采用纳米技术为依托，极大提高核酸转染的成功率，并且对细胞毒性较小，细胞的存活率得到了很大提升。千溯 生物围绕微纳米材料技术成功建成诊疗应用创新研发与服务平台，为广大客户提供优质的生物医学微纳米材料产品、科研定制服务以及医疗产品研发服务，成功研发“NP80TM
转染试剂盒”
作为药物递送的载体。（适用于多种细胞的一
款新型核酸转染试剂）
【产品参数】
【使用方法】
RNAi 或 siRNA 转染
本说明书适用于 24
孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。
-
细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（无抗生素），接种细胞密度在 30-50%。
-
RNAi（siRNA）-NP80 混合物准备：
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20 pmol siRNA 用 50μl 无血清培养基稀释。
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2μl NP80 用 50μl 无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育 5min。（注意：确保在 25min 内执行第三步操作，不要过于延迟）
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孵育 5min 后，将 siRNA 稀释液与NP80 稀释液混合（总体积 100μl）。轻轻混匀，室温孵育 20 min。
-
将 RNAi 混合物加到培养的细胞内。
-
将 100μl 混合物加入培养孔内，培养孔内含有 0.5ml 培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。
-
37°C 培养 18-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养 4-6h 时可以更换培养基。孵育时间的长短，取决于细胞类型、所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间
转染实验要点：
-
转染过程不可添加抗生素，否则会导致细胞死亡；
-
首次实验 RNAi 或 siRNA 的用量可稍大，后续实验根据实验结果修改。
RNAi 或 siRNA 转染实验优化
为了提高转染效率，最好对转染条件进行优化，特别是首次使用。例如：24
孔培养板，调整 RNAi
或 siRNA
与 NP80
试剂的用量。siRNA
用量在 10-50 pmol
之间调整，NP80
试剂用量在 0.5-1.5μl
之间调整。客户可按照、 用量进行预实验，适当调整转染试剂用量。
质粒 DNA 转染
使用以下步骤将 DNA
在 24
孔板内转染到哺乳动物细胞中。所有的数量和体积是基于一个孔给出的。对于大多数细胞系使用 1:2
到 1:3
比例的 DNA (μg)
和 NP80(μl)
制备复合物。
-
贴壁细胞:转染前 1 天，将 0.5-2×105 个细胞置于 500μL 不含抗生素的生长培养基中，使细胞在转染时融合率达到 70-90%。悬浮液细胞:在制备混合物之前，将 4- 8x105 个细胞置于不含抗生素的 500 μl 生长培养基中。
-
对于每个转染样品，准备混合物如下:
-
在不含血清的 Opti-MEM I Reduced Serum Medium(或其他不含血清的培养基)。
-
使用前将NP80 在 50 μl Opti-MEM I 培养基中稀释，室温孵育 5 分钟。
-
孵育 5 分钟后，将稀释后的DNA 与稀释后的 NP80(总体积 100 μl)结合。轻轻混合，在室温下孵育 20 分钟
(
溶液可能看起来混浊)
。
-
在含细胞和培养基的每个孔中加入 100 μl 的混合物，摇匀。
-
将细胞置于 37℃的 CO2 培养箱中培养 18-48 小时，检测转基因表达情况。培养基可在 4-6 小时后更换。
优化质粒 DNA 转染
为了获得高效的转染效率和较低的细胞毒性，可以通过改变细胞密度以及优化 DNA
和 NP80
浓度转染条件。确保细胞融合度大于 90%
，将DNA (μg): NP80 (μl)
的比例从 1:0.5
到 1:5
进行调整。
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NP80 Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels
|
Culture vessel
|
Surface
area/well (cm2)
|
Vol. of growth
medium (µl)
|
Vol. of dilution
medium (µl)
|
RNAi 或 siRNA
(pmol)
|
NP80
(µl)
|
DNA
(µg)
|
NP80
(µl)
|
|
96-well
|
0.3
|
100
|
2 x 10
|
5
|
0.5
|
0.2
|
0.5
|
|
48-well
|
0.8
|
250
|
2 x 25
|
10
|
1
|
0.4
|
1
|
|
24-well
|
2
|
500
|
2 x 50
|
20
|
2
|
0.8
|
2
|
|
12-well
|
4
|
1000
|
2 x 100
|
40
|
4
|
1.6
|
4
|
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6-well
|
10
|
2000
|
2 x 250
|
100
|
10
|
4
|
10
|
