Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。

特点：

1）能够成像和检测细胞中的脂质过氧化物

2）长波长激发，可以减少光损伤和自发荧光对细胞的影响

3）高度脂质过氧化物特异性

在铁死亡研究中：

作为细胞死亡形式之一，在铁死亡研究中使用到Liperfluo

Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。

激发波长Ex：488 nm，发射波长Em：500-550 nm

1.在dish等容器中接种细胞并培养。

2.去除培养基后，用无血清培养基清洗一次。

3.加入合适浓度的Liperfluo工作液，在37℃培养30 min。

※请根据细胞种类，诱导药物等实验条件，摸索最佳的Liperfluo工作液浓度。

4.去除上清液后，用无血清培养基清洗2次。

5.用荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。

用激光共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞

1) 在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种HeLa细胞 (3.0×104个/孔、含血清MEM培养基)，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞1次。

3) 将200 μl用无血清MEM培养基稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

4) 去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

5) 均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的 t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。

6) 用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。

用流式细胞仪检测HeLa细胞

1) 将HeLa细胞 (1.0×105个/孔、含血清MEM培养基) 接种至6孔板(Thermo公司) 中，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞1次。

3) 将2 ml用无血清MEM培养基稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入6孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

4) 去除溶液，用2 ml HBSS清洗2次。

5) 均匀地加入2 ml用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。

6) 用胰酶消化细胞后，用含有血清的MEM培养基重悬细胞，移至管中并将培养基更换为HBSS。

7) 用流式细胞仪检测 (激发波长：488 nm，发射波长：515-545 nm)。

用Erastin诱导铁死亡细胞的荧光成像

1) 在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

2) 去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。

3) 去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。

4) 去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。

5) 去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。

6) 用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。