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生化试剂

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PBMC细胞分离液,Lymphoprep 分离液(即用型), AS1114544/AS1114545/AS1114546/AS1114547

产品介绍【返回】

货号: AS1114544/AS1114545/AS1114546/AS1114547
保存条件: 4-30度
供应商: 上海觅拓生物
保质期: 3年
英文名: Lymphoprep™
规格: 1*250ml/4*250/500ml/6*500ml
规格: 1*250ml 产品价格: ¥640.0
规格: 4*250 产品价格: ¥2100.0
规格: 500ml 产品价格: ¥1100.0
规格: 6*500ml 产品价格: ¥4300.0


产品描述

Lymphoprep™ 是一种无菌的,经过内毒素检测的可以分离出纯的淋巴细胞的成品。成分包括泛影酸钠(Sodium Diatrizoate)和多聚糖
polysaccharide),浓度如下:

泛影酸钠 9.1% (w/v)
多聚糖 5.7% (w/v)

理化性质:
密度 1.077 ± 0.001 g/ml
渗透压 290 ± 15 mOsm

 
 

分离原则

最常用于分离白细胞的技术是通过复合物来凝集血液中的红细胞,从而增加他们的沉降速率。而白细胞的沉降速率几乎不被影响,通过离心就可以将红细胞和复合物沉降,并可以收集离心管上半部分的白细胞。Bøyum (1968) 通过甲泛影酸钠(sodium metrizoate)和多聚糖
polysaccharide的混合,发展出了一种一步离心分离淋巴细胞的方法。Thorsby and Bratlie (1970将这种技术稍加修改后,纯化出淋巴细胞用于细胞毒性测试及细胞培养。其他科学家,如HarrisUkayiofo (1969), Ting Morris (1971)分别使用该技术分离了尸体中的血液和在室温中保存超过小时的抗凝的血液,并证明了这是一种可靠地、简单的、快速分离淋巴细胞的方法。

稳定性和储存条件

Lymphoprep™ 在无菌和避光的条件下可以稳定保存3年。持续暴露在光照中会导致泛影酸钠中碘离子的分离。在日常使用过程中,这种影响可以忽略不计。Lymphoprep™ 的储存温度在+4oC~+30oC

分离步骤 (见右图)

  1. 用离心管收集抗凝血液EDTA,肝素,酸性的柠檬酸葡萄糖)或者脱纤血液。
  2. 用等量的0.9NaCl稀释血液。
  3. 12–15 mm的离心管中加入3 ml Lymphoprep™ ,并缓慢小心的加入6 ml 稀释好的血液,避免血液和分离液的混合,分离液应在下层, 盖上盖子避免气溶胶的形成。
  4. 室温下大约20°C),在水平转子中800 x g 离心20分钟。如果血液储存超过2小时,增加离心时间到30分钟。
  5. 如图所示,离心后,将会有明显的单细胞层,不用弃去上层液体,用巴斯德管小心的吸取细胞层。
  6. 0.9NaCl 稀释获得的淋巴细胞,250 x g 离心10分钟,弃上清,收集细胞。

纯度和活性

上面描述的方法可以快速,简单可靠的分离正常人和大部分病人的血液样本,并且效果显著。这项技术也可以分离其他淋巴细胞混合液中的淋巴细胞。淋巴细胞悬液中的红细胞数量通常占总细胞数的1%~5%。在强烈的免疫抑制治疗后,一些不成熟的粒细胞会混入淋巴细胞中。当使用肝素化的血液时,有必要先去除大多数的血小板,避免在细胞毒性测试中的抑制效应。上面提到的清洗步骤通常是足够充分的。
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