UniFect 细胞转染试剂
UniFect 细胞转染试剂
UniFect是经过化学修饰的阳离子高分子多聚物，可与核酸结合形成致密的纳米复合物。形成的复合物可以通过被动内吞方式进入细胞，也可以通过细胞表面的受体识别而被主动转运进入细胞。这个识别受体属于脂类吸收相关的组成型表达蛋白，在所有细胞中均有表达，在部分肿瘤细胞中表达有所上调。因此，UniFect相比传统的转染试剂能够明显提高转染效率，特别是对肿瘤细胞和原代细胞的转染。UniFect不受血清的影响，无需更换培养基。
规格：
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货号
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规格
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价格
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TRN-Uni-75
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0.75 ml
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780元
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TRN-Uni-150
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1.50 ml
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1480元
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储存条件：4度，稳定保存1年。
特征：
1. 细胞铺板后可立即转染，节省时间；
2. 不受血清影响，转染前后可不更换培养基；
3. 低毒性， 转染效率高，对肿瘤细胞和原代细胞尤其适合；
4. 对悬浮细胞转染效率高，适合用于抗体的表达。
注意事项：
1， 配制转染复合物使用Opti-MEM，请勿使用有血清的培养基进行配制，否则会导致转染效率下降。
2， 本产品为无菌产品，使用时请按照无菌方法进行操作。
3， 本品4度保存，请勿反复冻融
贴壁细胞转染方法：
1. Day 0，将贴壁细胞铺到细胞板上，接种数量可参考下表(表中e表示指数，如：1e4=10000，1e5=100000,下同)。本方法以6孔板为例，每个孔铺4e5个Hela细胞，加2ml培养基。
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培养容器
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面积（cm2）
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接种细胞数
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培养基体积（ml）
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96-well板
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0.3
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1e4 – 1.7e4
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0.1 - 0.2
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48-well板
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1
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2.5e4 - 5e4
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0.25 - 0.5
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24-well板
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1.9
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5e4 - 1e5
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0.5 - 1
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12-well板
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3.8
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8e4 - 2e5
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1 - 2
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6-well板
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9.4
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2e5 - 4e5
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2 - 4
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35-mm培养皿
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60-mm培养皿
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28
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4e5 - 8e5
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5 - 10
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25-cm2培养瓶
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100-mm培养皿
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75
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2e6 - 4e6
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10 - 15
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75-cm2培养瓶
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2. Day 1，将3 ug的DNA加到100ul的Opti-MEM中，振荡混匀。
3. 将12 ul UniFect加到100ul的Opti-MEM中，立即振荡混匀。推荐DNA量（ug）和UniFect体积（ul）的比例是1:4，对于不容易转染的细胞，建议单独优化转染比例。
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培养容器
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DNA量（ug）
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UniFect体积（ul）
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配制体积（ul）
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转染复合物总体积（ul）
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96-well板
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0.25
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1
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20
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40
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48-well板
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0.5
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2
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25
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50
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24-well板
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1
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4
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50
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100
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12-well板
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2
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8
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50
|
100
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6-well板
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3
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12
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100
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200
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35-mm培养皿
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60-mm培养皿
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5
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20
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250
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500
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25-cm2培养瓶
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100-mm培养皿
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10-20
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40-80
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400
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800
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75-cm2培养瓶
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4．将配置好的UniFect溶液加到DNA溶液中，立即摇匀，推荐边摇动边滴入UniFect溶液。不要将两种溶液颠倒加入，否则会影响转染效率。将混匀得到的转染复合物室温放置15-30min。，然后将转染复合物直接加至2ml含血清培养基中，均匀的滴到6孔板的孔中。一般在24-48小时后检测转染效果。
悬浮细胞的转染：通常悬浮细胞转染UniFect和DNA用量比贴壁细胞要大。初始转染推荐比例1:3，优化可以用到1:4。细胞数和DNA转染量可以参照下表：
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培养容器
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接种细胞数
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培养基（ml）
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DNA量（ug）
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UniFect （ul）
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配制体积（ul）
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转染复合物总体积（ul）
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96-well板
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2e4 - 5e4
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0.2
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0.2-0.4
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0.6-1.2
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20
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40
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48-well板
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5e4 - 5e5
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0.5
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0.5-1
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1.5-3
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25
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50
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24-well板
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1e5 - 2e5
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0.5-1
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1-2
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3-6
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50
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100
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12-well板
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2e5 - 5e5
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1-2
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2-4
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6-12
|
50
|
100
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6-well板
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5e5 - 1e6
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2-4
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6-12
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18-36
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100
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200
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35-mm培养皿
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60-mm培养皿
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1e6 - 2e6
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5-10
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10-20
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30-60
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250
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500
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25-cm2培养瓶
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100-mm培养皿
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3e6 – 6e6
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10-15
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30-60
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90-180
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400
|
800
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75-cm2培养瓶
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其他步骤与贴壁细胞相同。
抗体表达转染（以293F细胞，100ml转染体积为例）：293F细胞提前一天接种，转染时细胞在1e6/ml左右；转染时，将60ug的重链质粒和40ug的轻链质粒加到1ml的Opti-MEM中，混合均匀；300ul UniFect加到1ml的Opti-MEM，混合均匀；其他步骤与贴壁细胞相同。
