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Phosphatase, Alkaline 碱性磷酸酶；ALP/AKP；对硝基苯酚磷酸盐（pNPP）；偶氮偶联法；显色法（定量）；染色法（定性）；

产品信息

产品描述

处于未分化状态的胚胎干细胞（ES）和诱导多潜能干细胞（iPS）典型特征是呈高水平的碱性磷酸酶表达，同时结合其他的一些表面标志物，来显示未分化细胞具自我更新的潜能。碱性磷酸酶（ALP，或AP）是一种水解酶，碱性条件下能够将核苷酸、蛋白、甾醇等分子去磷酸化作用。固定ES或iPS用碱性磷酸酶染色试剂盒染色后，未分化细胞呈红/紫色，而分化细胞呈无色。

本碱性磷酸酶染色试剂盒特异性强，灵敏度高，可为ES/iPS细胞分化的表型评估提供可靠的依据。对于其他细胞来说，染色越深，表明细胞内ALP活性越高。以24孔板染色为例，分别可做50次和100次染色。

产品组分

保存与运输方法

保存：2-8℃保存，6个月稳定。

运输：冰袋运输。

注意事项

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

操作步骤（以24孔板染色为例）

1. 实验前准备材料：PBST缓冲液、PBS缓冲液
2. 染色工作液准备：按照如下比例【溶液A: 溶液B: 溶液C=1:1:1】，配制适量染色工作液。请务必根据单次实验用量制备染色工作液。为了保证最佳染色结果，需在配制30min内用完染色工作液，多余染色工作液请丢弃。
3. 染色步骤

1. 吸出细胞培养液，PBST洗2~3次，用0.5ml固定液室温固定2~5min。【注意】：固定不要超过5min，过度固定会导致ALP失活）。
2. 吸出固定液，PBST洗2次；
3. 吸出PBST。加入0.6ml/孔染色工作液覆盖细胞，室温避光放置5~15min；【注意】：染色过程需密切监督颜色变化，当颜色很明亮即可终止反应，否则会引起非特异性染色。
4. 吸出染色工作液，用PBS洗2次，最后保存于PBS或封片剂内防止干燥，显微镜下观察染色结果。结果判定：未分化细胞染色呈红/紫色，分化细胞染色呈无色。
5. 将平板保存在4℃。

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